HPLC法测定山茱萸中没食子酸的含量
 
童荣生（四川省医学科学院·四川省人民医院药剂科，成都 610072）           

摘要：目的：建立山茱萸药材中没食子酸的含量测定方法，以控制其质量。方法：采用高效液相色谱法，以Discovery C18(5μm,250×4.6mm)为色谱柱，甲醇-0.1%磷酸溶液（8:92）为流动相，检测波长271nm。结果：没食子酸的进样量在0.040μg～0.400μg范围内与其峰面积值有良好线性关系（r=0.9999）,平均加样回收率为100.78%，RSD为1.64%。结论：该方法简便易行、准确可靠，可用于山茱萸药材中没食子酸的质量控制。

关键词：没食子酸；高效液相色谱法；山茱萸

Determination of Gallic Acid Contained in Fructus Corni by HPLC

Abstract: Objective：To establish a method for determination of gallic acid contents in Fructus Corni by HPLC. Methods：The determination was performed on a Discovery C18 conlumn(5μm,250×4.6mm)by UV detector at 271nm with methanol-0.1% phosphoric acid(8:92)as the mobile phase at the flow rate of 1.0ml/min. Results：The amount of gallic acid was linear with its area over the range

from0.040 to 0.400μg(r=0.9999).The average recovery and the relative standard deviation of gallic acid were 100.78% and 1.64%(n=6),respectively. Conclusion:The method appeared to be sensitive,accurate and can be used for the quality control of  gallic acid in Fructus Corni.

Key words：Gallic acid；HPLC；Fructus Corni

山茱萸为山茱萸科植物。山茱萸cornus off icinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉。它是我国40种重点常用中药材之一，具有补益肝肾、涩精固脱的功效，用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿尿频、大汗虚脱等症候。目前，国家标准中是用薄层扫描法测定其三萜类成分——熊果酸的含量，而没有对有机酸类成分——没食子酸进行含量测定[1]。近年来研究表明，没食子酸具有收敛、止血、止泻、杀菌、抗病毒等作用[2]。因此，本文建立了HPLC法测定山茱萸中的没食子酸的含量，为其质量控制提供依据。

1  仪器与试药

1.1 仪器   Alliance高效液相色谱仪（2690溶剂输送系统，996二极管阵列检测器，Millenium32数据管理系统，美国Waters公司）；UV-2100型紫外可见分光光度计（日本岛津）；十万分之一电子天平（西德Sartorius）。

1.2 试药  没食子酸为中国药品生物制品检定所提供（0831-9501），在选定色谱条件分离后，按归一化法计算得含量为99.56%。甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。山茱萸药材由成都中药材公司提供（产于四川安县）。

2  方法与结果

2.1色谱条件  色谱柱：Discovry C18(5μm,250×4.6mm)，柱温：25℃。流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（8:92），流速：1.0ml/min。检测波长：271nm，灵敏度：0.01AUFS。

2.2检测波长的确定  取没食子酸对照品适量，用流动相稀释成10μg/ml，以流动相为空白，在200～600nm波长范围内扫描。结果表明，Cur在271nm波长处有最大吸收。

2.3 标准曲线的制备  精密称取没食子酸对照品适量，用甲醇溶解并稀释成20.0μg/ml的储备液。精密量取此储备液2.0、4.0、8.0、16.0、20.0μl进样，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值（A）对进样量（C）进行回归，得标准曲线方程为：A=2.132×106C+1.486×102，R=0.9999。结果表明，没食子酸的进样量在0.040μg～0.400μg范围内，与其峰面积值有良好的线性关系。

2.4 供试品溶液的制备  取山茱萸药材，60℃下干燥至恒重，粉碎成粗粉，精密称定1g，加50%甲醇40ml，超声提取2次，每次30min，滤过，加50%甲醇定容至100ml，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，进样。在选定色谱条件下，没食子酸和样品中其它组分色谱峰可基线分离，分离度大于1.5，没食子酸对照品、山茱萸药材样品色谱图见图1、图2。

图1    没食子酸对照品

图2   山茱萸样品

2.5 精密度试验  精密吸取同一供试品溶液10μl，重复进样5次，测得没食子酸峰面积的相对标准差（RSD）为0.86%。

2.6 稳定性试验  取同一样品供试液分别于0、2、4、6、8h，进样10μl，测得样品中没食子酸峰面积值的RSD为0.92% 。实验表明，样品供试液在8h内稳定性良好。

2.7 重复性试验  按拟定的含量测定方法，取同一批样品五份，分别制备样品供试液，测得没食子酸含量的RSD为1.53%。

2.8 加样回收率实验  精密称取已知含量的山茱萸粗粉（没食子酸含量为0.21%），加入一定量的没食子酸对照品，按供试品溶液制备方法操作，取10μl进样、测定，结果没食子酸的平均回收率为100.78%，RSD为1.64%(n=6)。结果见表1。

表1  加样回收率试验结果

2.9 样品测定  对三批药材的含量测定结果见表2。