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6-硫代鸟嘌呤合成

非售品
CAS:154-42-7
分子式:C5H5N5S
分子量:167.19

1、以cAMP为原料cAMP三乙胺盐的制备投料比为cAMP(m):0.4mol/L三乙胺(V):无水吡啶(V)=1:7.2:5.3。在冷冻下将cAMP加入0.4mol/L三乙胺溶液中使其全部溶解,在室温下抽去剩余的三乙胺(至无臭味或pH=9-9.5),加热在55℃下减压浓缩,加无水吡啶脱水,55℃减压蒸去无水吡啶,重复脱水和蒸馏一次,最后可得到海绵样产物,干燥,得cAMP三乙胺盐。

       cAMP粗品[三乙胺,无水吡啶]→[pH9-9.5,55℃]cAMP三乙胺盐双丁酰环磷腺苷酸(DB-cAMP)的制备投料比为cAMP三乙胺盐(m):重蒸丁酐(V):无水吡啶(V):蒸馏水(V)=1:7.5:15:6.9。将cAMP三乙胺盐和重蒸丁酐及无水吡啶混合后,在35-40℃下密闭恒温反应6-7天(反应终点的测定可用下法:取反应液加等量蒸馏水,冰箱中放置4h后层析应呈单点,Rf=0.85左右)。

       反应完成后,在10℃下缓慢加入蒸馏水水解,为促使水解反应完全可将水解液置于冰浴中放置2-3h。50℃以下减压蒸馏,加乙醚溶解,用蒸馏水提取,水层在40℃以下减压浓缩,再加乙醚溶解,抽去乙醚,加无水乙醇溶解成糖浆状,得双丁酰环磷腺苷酸。cAMP三乙胺盐[重蒸丁酐]→[35-40℃,6-7d]双丁酰环磷腺苷酸双丁酰环磷腺苷酸钙的制备投料比为cAMP(m):无水氯化钙(V):无水乙醚(V):无水乙醇(V)=1:0.26:9.5:1.1。

         将上步骤中所得的双丁酰环磷腺苷酸糖浆状物中加入溶于蒸馏水(1.57倍)和乙醇(3.1倍)中的无水氯化钙溶液,混匀后,室温下减压浓缩至干,加少量无水乙醚润湿后再抽干,干燥过夜后加无水乙醇溶解成厚浆状,冰浴下缓慢加入无水乙醚,抽滤,用无水乙醚洗涤,干燥,得双丁酰环磷腺苷酸钙成品。

        双丁酰环磷腺苷酸[氯化钙、水、乙醇、无水乙醇、乙醚]→[浓缩、沉淀]双丁酰环磷腺苷酸钙。

2、以青霉菌菌体为原料提取、热处理、沉淀将新鲜的青霉菌菌体加入三倍量的0.5%氢氧化钠溶液中,8℃搅拌下提取2h,加6mol/L盐酸调至pH7,迅速加热至90℃保持10min,过滤,滤液冷却,用6mol/L盐酸调pH2.5,低温静置过夜,除去上清液,离心,收集沉淀,得核糖核酸粗品。

        青霉菌菌体[氯化钠,盐酸]→[8℃,2h]提取液[6mol/L盐酸]→[pH7,90-10℃]上清液[6mol/L盐酸]→[pH2.5]精制品酶解、热处理粗品加水溶解,配成1%的溶液,用稀氨水调Ph=5.6-6.2,搅拌下加热至68-70℃,将酶液预热至50℃,取一半与核酸液混合,63-65℃反应20min,再加另一半酶液,反应2h,加热至95℃,保温15min,使酶失活,冷至室温,加6mol/L盐酸调pH3,在10℃下静置过夜,过滤,得5’-核苷酸粗制液。

        粗制品[氨水,5’-磷酸二酯酶]→[pH5.6-6,63-65℃,20min]酸解液[6mol/L盐酸]→[95℃,pH3,10℃]5'-核苷酸粗制液吸附、洗脱取粗制液加6mol/L氢氧化钠中和至pH7.2,上711氯型阴离子交换树脂柱,用蒸馏水冲洗后以3%的氯化钠溶液洗脱,洗脱液从pH7开始收集,得5'-核苷酸钠纯化液。

        5'-核苷酸粗制液[6mol/L氢氧化钠,717树脂]→[pH7.2]吸附物[3%氯化钠]→[pH7]5'-核苷酸纯化液制剂将纯化液加0.5%-1%的活性炭,加热至100℃,煮沸10min,冷却过滤,收集滤液,再加0.5%-10%的活性炭,室温下搅拌30min,过滤,收集滤液,得5'-核苷酸钠精制液。

        热原、毒性、含量测定合格后,除菌、过滤、分装、封口,制成5'-核苷酸钠注射液。

        5'核苷酸纯化液[活性炭]→[100℃]5'-核苷酸钠精制液[制剂]→5’-核苷酸钠注射液以谷氨酸菌体为原料自溶、脱盐谷氨酸发酵液离心后收集得湿的菌体,加等体积的水,与菌体混合成匀浆,投入碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(重量比为碳酸钠:碳酸氢钠=2:1,pH=10)1000L中,不断搅拌,控制pH9.5-10,温度65-70℃,搅拌20min,加入处理好的16-50目732氢型阳离子交换树脂进行脱盐,pH下降到4.8-5.2时脱盐完毕。静置,使溶液与树脂自然分层得自溶液。

        谷氨酸菌湿菌体[水、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液]→[pH9.5-10,65-70℃]上清液[732阳离子交换树脂]→[pH4.8-5.2]脱盐自溶液澄清、中和将自溶液加入盐酸调pH3.5,使菌体沉淀,静置1-2h,将上清液用氢氧化钠调pH7-7.2,冷至40℃,得混合单核苷酸稀溶液。

        脱盐自溶液[盐酸]→[pH3,5]上清液[氢氧化钠]→[pH7-7.2]混合单核苷酸稀溶液吸附、洗脱、中和、浓缩稀溶液先上石英沙柱,再上717氯型阴离子交换树脂柱,用5倍量的树脂体积的蒸馏水洗涤,然后用0.2mol/L的盐酸洗脱,当pH下降到3.5有鲜味时,开始收集洗脱液,至pH0.5时停止收集。洗脱液用氢氧化钠溶液中和至pH6.5-7,减压浓缩,过滤,得混合5'-核苷酸溶液。

        混合单核苷酸稀溶液[717阳离子交换树脂柱]→吸附[0.2盐酸]→[pH3.5-0.5]洗脱液[氢氧化钠]→[pH6.5-7]混合5’-核苷酸溶液。