食用香料——香兰素的抗氧化活性研究

　　摘要：对食用香料香兰素的抗氧化活性进行了研究。分别采用甲基紫光度法、TBA显色法、SDS—PAGE检测法评价了香兰素的抗氧化效果。结果表明，香兰紊对蛋白质氧化降解具有明显的保护作用，对脂质过氧化有较好的抑制作用，具有良好的清除HO·自由基的能力，其抗氧化活性远远强于Vc。

　　关键词：香兰素；vc；抗氧化活性

　　香兰素(vaniUin)又名香草醛，为天然植物香料，主要存在于香子兰科植物果实中，在轻工业、化学工业、农业生产上都有广泛的应用，是医药化工中重要的原料或中间体，是用来制造治疗高血压、心脏病、皮肤病的常用药物。香料在食品上的应用，主要是改善食品风味，增添食物色泽。另外，有防止食品变质的抗氧化及抗菌作用，研究发现，许多香料如：迷迭香、姜黄、丁香、百里香等都具有较强的抗氧化活性。

　　活性氧(ROS)是人体组织中许多生化反应的中问代谢产物，身体在代谢过程中所产生的ROS必须与组织细胞中的抗氧化系统达成平衡，一旦身体的抗氧化系统失去平衡，细胞中的氧化损害累积到相当程度，就会导致细胞结构和功能破坏、机体组织损伤。因此，ROS是包括肿瘤、心脑血管疾病、帕金森疾病、老年痴呆病和慢性肺炎等在内的多种疾病的重要诱因网。寻找能够有效清除自由基而无毒副作用的抗氧化剂，预防和减轻上述疾病的发生和发展，一直是人类研究的重要课题之一。本文用甲基紫光度法、TBA显色法、蛋白质凝胶电泳法测定了香兰索的体外抗氧化活性，并比较、分析了香兰素与已知抗氧化剂Vc的抗氧化能力。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　香兰素：瑞尔丰化工有限公司；Vc、AAPH(2，2～偶氮二(2一脒基丙烷)二盐酸盐)、BHT(2，6一二叔丁基对甲基苯酚)：Sigma公司；牛血清白蛋白(BSA)；华美生物工程公司；十二烷基磺酸钠(SDS)：Serva；实验用鼠由甘肃省肿瘤医院动物房提供，其余试剂均为国产分析纯。

　　1.2仪器

　　LSHZ一300冷冻水浴恒温振荡器：江苏太仓市实验仪器厂；DYY一6B型稳压稳流电泳仪：北京六一仪器厂；L8—60M型超高速离心机：Beckman；721分光光度计：上海第三分析仪器厂。
　　
    1.3方法

　　1.3.1清除HO·自由基的测定

　　取两份2.06mmol／L甲基紫溶液，调pH为3.5后，向其中一份加入0.2mmol／LFeSO4，以0.6%H2O2启动反应，一段时问后，以水为参比，于582nm处测吸光度值，记为A1。另一份不加Fenton试剂，测吸光度值，记为A。。则ΔA=A1一A。。测定清除率时，加入待测试剂，测吸光度值，记为A2。HO·的清除率=(A2一A1)／(A1一A0)×100%。

　　1.3.2脂质过氧化的测定

　　微粒体的制备参照Zhou等闻的方法。Lowry法测定蛋白质浓度。

　　脂质过氧化的测定参照Cai等嘲。1mL反应体系中含有0.2mol／LPBS，240μg-400μg的微粒体蛋白，加入0.1mmol／L抗坏血酸及10μgmol／LFeSO4启动反应。在体系中加入0.1mL不同浓度待测物，于37℃振荡孵育1h后，1.0mL20%三氯醋酸终止反应，加入1.5mL0.67%硫代巴比妥酸，于沸水浴显色30min，冷却后离心，上清液于532nm比色，其半抑制浓度IC50。

　　1.3.3蛋白质氧化降解的测定

　　蛋白质氧化测定依H.Y.Kwon等[61的方法稍加改进。10μg牛血清白蛋白(BSA)的氧化在0.2mol／LPBS中由水溶性偶氮引发剂2Ommol／LAAPH启动，加入不同浓度的待测物，37℃水浴孵育24h后，加入0.02%BHT以防止氧自由基的进一步形成。样品按常规SDS—PAGE电泳，0.05%考马斯亮蓝R一250染色。

　　2结果

　　2.1对HO·自由基的清除作用

　　香兰素对HO-自由基的清除率呈现一定的量效关系(见图1A)，随香兰素浓度的增加，对HO-的清除效果明显增强，在浓度为180μmol／L清除率达到5O%，Vc在1000μmol／L时的清除率仅为41%(图1B)，对HO-的清除作用不及香兰素。

　　2.2对脂质过氧化的抑制作用

　　香兰素对脂质过氧化的抑制率也呈现一定的量效关系，随香兰素浓度的增加，对脂质过氧化的抑制效果明显增强，在浓度为76μmol／L抑制率达到50%，与此相比，vc对脂质过氧化的抑制作用要远远低于香兰素，Vc在5000μmol／L时抑制率达到51%。

　　2.3对蛋白质氧化的保护作用

　　在10mmo]／LAAPH引发的氧化体系中，香兰素(V)对BSA的氧化降解有很强的保护作用，当浓度为12.5μmol／L时，即有微弱的保护作用。当浓度为100μmol／L时，已完全保护了蛋白质的氧化降解。Vc对AAPH引发的蛋白质氧化降解的作用则较差，在2000μmo／L时，才出现微弱的保护作用。

　　3讨论

　　近年来，国内外对香兰素已有很多研究，主要为香兰素合成方法的研究，有关香兰索抗氧化性的报道极少，香兰素在国内除直接用于制作食品外，主要用于调制食用香精，香兰素对含油食品具有明显的抗氧化作用，可显著延长含油食品的保质期，对细菌及真菌的生长有明显的抑制作用，另外，香兰素对癫痫也有一定的治疗效果啕。Vc是已知的HO-清除剂，对自由基具有很强的清除能力，是一种较早应用于食品、医药和临床的抗氧化剂。在鉴定、比较各种药物对自由基的清除能力时经常以它作为参照物。不同浓度Vc对Fenton反应所产生的羟基自由基进行清除时，其浓度与清除率之间存在明显的量效关系嘲。但从本实验结果来看，Vc抗脂质过氧化的作用较弱，表明Vc在此过氧化系统中的抗氧化作用是十分有限的。

　　在本实验体系中，低浓度的香兰素对脂质过氧化和蛋白质的氧化降解，表现出很强的保护作用。其清除HO·自由基、抑制脂质过氧化和对蛋白质的氧化降解的保护作用明显优于Vc。实验证明，香兰素是一种很好的抗氧化剂，具有良好的抗氧化活性。我国具有丰富的香兰素资源，很大一部分以化工生产的中间体出口到国外，国内对香兰素的应用也仅限于食品、纺织和合成化工等行业，通过对香兰素抗氧化活性的研究，香兰素在食品和医药行业将具有更加广泛的开发前景。