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钴胺素检测方法

非售品
CAS:10191-41-0
分子式:Bl2
分子量:

本品含96%以上dl-α-生育酚(C29H50O2)。
1.性状
本品为淡黄~黄褐色的粘稠状液体,无臭②。
2.鉴定试验
(1)本品的无水乙醇溶液(1→20,000),在波长292±1nm处有最大吸收峰。
(2)取本品10mg,溶于10mL无水乙醇中,加硝酸2mL,75℃下加热15min,溶液呈现红~珠红色③。
3.纯度试验
(1)相对密度  本品的相对密度应是0.947~0.955。
(2)折射率  本品的折射率应是 1.503~1.507。
(3)溶解性  将本品0.1g溶于无水乙醇中,在292nm波长处测定吸光度。
(4)比吸光度  将本品溶于无水乙醇中,在292nm波长处测定吸光度应是 =71~76。
(5)砷  取本品1g,加到分解烧瓶中,加硫酸5mL及硝酸5mL,缓慢加热,再不断补加硝酸,每次2~3mL,加热到溶液呈无色~淡黄色为止,冷却后加饱和草酸铵溶液15mL,加热浓缩至产生白烟为止,溶液为2~3mL,冷却后,加水至10mL,取5mL作检液,进行砷的试验,应符合要求,对照溶液是取砷标准溶液2mL到分解烧瓶中,加硝酸5mL及硫酸5mL,以下和检样进行同样操作。
(6)重金属  取本品1g,加到石英制或瓷制坩埚中,缓慢加热,在500℃以下进行碳化,加盐酸1mL及硝酸0.2mL,于水浴上蒸发至干,加入稀盐酸1mL及水15mL加热溶解,冷却后加酚酞试液1滴,滴加氨水到溶液稍稍呈现红色为止,加稀酸酸2mL,必要时过滤,作为检液进行重金属的常规试验,其量应在0.002%以下。
4.定量法
精确称取本品50mg,溶解在100mL硫酸-乙醇溶液中(3→200),加水20mL,边振荡边滴加0.005mol/L硫酸铈铵溶液(指示剂:二苯胺试液2滴),紫操作要在暗处进行,滴加速度约10s、25滴,滴定终点是溶液蓝紫色持续10s,另外用同样方法进行空白试验④⑤。
0.005mol/L硫酸铈铵溶液1mL=2.154mg C29H50O2
注  解
①自然界中存在的是d体,合成的是dl体,因d体的旋光性非常小,难以和dl体区别,为了鉴别d体和dl体,测定它们在碱性红血盐中氧化后生成物的旋光度,dl体氧化后没有旋光性,d性 +27.5°(用色谱法精制[α]+31°)用这种方法容易区别两者。
②空气中,特别是碱存在时,易氧化变成暗红色,对可见光比较稳定,对紫外线不稳定。利用其易氧化性质,作为抗氧化剂。
③用硝酸氧化生成生育红(tocored),呈现红色,由γ-生育酚(γ-tocopherol)容易制成。此瓜也用在维生素E的定量。
④被Ce4+氧化生成对-生育酚醌(P-tocopherolquinone)[2]和JPIX一样用较易标定的0.005mol/L硫酸铈铵液作为滴定液。
⑤其它的定量法:
a:Emmerie-Engel法是二氯化铁与生育酚反应,还原生成的一氯化铁与α,α’-双吡啶(α,α’-dipyridyl)结合生成红色络合物,进行比色定量。不能分别定量生育酚同族体。现在广泛用于食品和动植物组织中生育酚的定量,是精度很高的方法。
b:Emmerie-Engel法的改良法是用bathophenanthroline或者tripyridyltriazine作显色试液代替α,α’-双吡啶的方法,灵敏度提高二倍以上。
c.Furter-Meyer法(硝酸法)是用硝酸氧化生育酚生成红色的生育红,进行比色定量。此法具有特异性,但比Emmerie-Emmerie-Engel法灵敏度差,不用于定量,用于鉴定反应。
d.其它还有荧光法、磷钼酸法,溶血试验法等,还用分离定量同族体的薄层色谱法、气体色谱分离法。